启衡星血液样本直接PCR/qPCR解决方案

  在临床检测中，血液是最主要的检测样本之一。随着分子检测技术的快速发展和普及，基因检测技术现已广泛用于疾病检测或者疾病早筛。血液样本中含有大量的自体或病原体核酸，通过对血液中DNA/RNA进行检测可获得大量信息，以用于疾病筛查和健康管理，如遗传病、疾病早筛（如肿瘤早筛）、感染疾病检测或者法医身份鉴定等。

   在分子诊断领域，常用的检测方法有PCR、qPCR、二代测序等。目前常规检测方法是先提取、纯化核酸，然后对提取后核酸进行下游检测。以DNA提取为例，提取时间需要1-2个小时，PCR/qPCR检测时间大概1个小时，整个实验过程大约需要3个小时。

为提升血液检测效率，一种对血液前处理之后直接进行PCR/qPCR的检测方法应运而生。但此方法因对样本过多的前处理、扩增效率过低、抗抑制性差等因素，导致应用场景受限。

北京启衡星生物通过构建筛选基因工程酶，优化扩增buffer，实现了对多种血液样本在简单裂解后进行高效PCR/qPCR检测，整个实验流程缩短至1小时，同时具备优异的抗干扰能力和稳定的扩增效率。

血液直接PCR预混液（StarLighter Blood Direct PCR Mix）

StarLighter Blood Direct PCR Mix采用独特的PCR缓冲液体系，可高效降低血液中的抑制剂对扩增的影响，无需DNA纯化或样品处理即可以全血样本为模板进行直接PCR，适用于不同保存条件下的EDTA抗凝血样本，可用于单重或多重的血液直接扩增。

产品优势及实验数据

1、适用于多重扩增，兼容不同GC%含量的模板，扩增均一性好，血液input量范围宽。

Fig2.1 使用启衡星及供应商T的血液直扩试剂盒分别对5%、10%、15%、20%、25%、30%不同比例新鲜EDTA抗凝血进行6重引物的直接扩增，扩增片段范围200-800bp，GC%范围35%-77%，扩增35个循环，取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。
结果显示，启衡星血液直扩试剂盒在产物量、扩增均一性上均优于供应商T。

Fig 2.2 EDTA抗凝血在室温存储条件下的血液直扩结果

对于室温、4℃、-20℃等不同保存条件的EDTA血液样本，启衡星StarLighter Blood Direct PCR Mix能对六条目的产物进行准确扩增。 

                                                                                                      

                                                                                                                                 Fig 2.3 EDTA抗凝血在4℃和在-20℃储存时间条件下的血液直扩结果

PART TWO血液简单裂解直扩qPCR试剂盒（StarLighter Probe qPCR Kit for Blood）

 StarLighter Probe qPCR Kit for Blood适用于各种类型的血液样本，无需繁琐的核酸提取纯化，仅须血液样本简单裂解取上清即可进行qPCR扩增，操作简便，可降低污染风险，且检测结果与核酸提取后的纯DNA产物作为模板的结果一致。

产品优势及实验数据

1. 操作快速，从血液样本到完成基因分型/定量分析，1小时搞定大难题。

Fig 3.1 StarLighter Probe qPCR Kit for Blood试剂盒操作流程图

2. SNP分型准确，兼容多种类型的样本：用已知SNP基因分型的新鲜血液样本A和冷藏（4°C储存2个月）血液样本A对三个基因位点进行检测，结果均与Sanger测序完全一致。

Fig 3.2 新鲜血样本A裂解释放后对不同SNP位点的检测结果。血液裂解离心取上清，20 μL反应体系，加4 μL 上清做为模板进行qPCR，检测结果与Sanger测序结果一致。

Fig 3.3 储存血样本A裂解释放后对不同SNP位点的检测结果。血液裂解离心取上清，20 μL反应体系，加4 μL 上清做为模板进行qPCR，检测结果与Sanger测序结果一致。

3. 检测结果与提取纯化后进行qPCR一致：对同一样本分别通过StarLighter Probe qPCR Kit for Blood试剂盒及传统血液基因组DNA提取试剂盒后进行qPCR等两种方法对特定基因位点进行检测，实验结果显示两种方法检测的Ct值与荧光强度非常一致。

Fig 3.4 启衡星StarLighter Probe qPCR Kit for Blood试剂盒与传统血液核酸提取试剂盒提取后qPCR的数据对比。粗线为核酸释放液处理的qPCR结果，细线为全血基因组DNA提取纯化后的qPCR结果。蓝色为FAM通道，橘色为Rox通道（内参），绿色为Vic通道。

从技术突破到场景落地，启衡星生物整合样本前处理、核心酶开发、buffer体系优化等多平台产品开发经验，以血液DNA简单裂解后直扩为核心打造了全流程的解决方案。无论是自动化/手动全血提取的高纯度保障、直扩PCR的极简突破，还是快速裂解qPCR的高效精准，每一项技术都凝聚着对行业痛点的深刻洞察与革新实践。未来，启衡星将再接再厉，推动血液基因检测技术向更深、更广的维度拓展，推动从样本处理到精准分析的全流程优化，为更多应用场景提供产品应用支持。