StarLighter dsDNA 高灵敏检测试剂盒

    StarLighter dsDNA HS (High sensitivity) Assay Kit是一款简便、快速、灵敏、准确度高的双链 DNA (dsDNA)荧光定量检测试剂盒。本试剂盒包含荧光检测试剂、标准品和缓冲液，对dsDNA有高度选择性，RNA干扰小，对于dsDNA样本在0.1 ~ 100 ng之间有良好的线性。相比于传统的紫外检测(A260)方法，试剂盒基本不受其它物质的干扰，如RNA、蛋白等，可更精确地对DNA进行定量，提高实验的准确性。本试剂盒操作简单，可使用荧光酶标仪或 Qubit荧光计进行检测。

产品组分

运输及储存条件

2 ~ 8℃ 保存，冰袋运输。

产品特点

灵敏度高：可以对0.1 ~ 100 ng/µL的dsDNA样本进行精确定量；

特异性强：只结合dsDNA，不受RNA、蛋白等的影响；

耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可直接定量PCR扩增产物；

操作简便：将荧光试剂用缓冲液稀释成工作液，然后加入待测dsDNA样本，即可进行检测，此操作在室温下即可进行。

注意事项

1. 试剂盒各组分每次使用前需混匀。
2. 荧光染料均存在淬灭问题，请注意避光，以减缓荧光淬灭。
3. 使用Qubit荧光计进行检测时，必须用配套试剂的标准品重新标定，以保证结果的准确性。
4. 使用Qubit荧光计进行检测时，需使用5 mL薄壁透明的分析管。
5. 如待测样本浓度高于100 ng/µL，请适当稀释后再进行检测。

实验操作流程

1. 使用Qubit 荧光计进行 dsDNA 定量检测分析
   • 使用前，务必将试剂盒中的各组分平衡至室温并充分混匀；
   • 配制检测工作液。按照QF : QB 体积比 1:199 的比例配制检测工作液，现用现配。例如检测 8个DNA 样本，以及2个标准品，预留分装损耗，建议配制 11 个样本工作液：11 µL QF + 2189 µL QB 缓冲液，涡旋混匀，制成检测工作液；
   • 向标准品管中加入190 µL 新鲜配制的工作液，向样本管中每管加入新鲜配制的工作液 180 ~199 µL（根据加入的样本体积而定，样本体积可加入 1 ~ 20 µL，使得总体积达到 200 µL)；
   • 向相应的标准品管中分别加入10 µL DNA 标准品 QS0和 DNA 标准品 QS1，向样本管中加入一定体积 (1 ~ 20 µL) 的待测 dsDNA 样本，使管中总体积达到 200 µL，涡旋混匀 2 ~ 3 sec；
   • 将标准品管和样本管置于室温环境下避光静置孵育2 min；
   • 按照Qubit 荧光计的操作说明，选择 dsDNA High Sensitivity 检测程序测定荧光信号值。

2. 使用荧光酶标仪进行 dsDNA 定量检测分析
   • 使用前，务必将试剂盒中的各组分平衡至室温并充分混匀；
   • 配制检测工作液。按照QF : QB 体积比 1:199 的比例配制检测工作液，现用现配。例如检测 5 个 DNA 样本，同时需要 5 个标准品，可由标准品 S1系列稀释，浓度范围 0 ~ 10 ng/µL，因此理论需要配制 10 个样本的工作液，预留分装损耗，建议配制 11 个样本工作液：11 µL QF + 2189 µL QB 缓冲液，涡旋混匀，制成检测工作液；
   • 向96孔酶标板中加入新鲜配制的检测工作液，标准品孔加入190 µL 工作液，DNA 样本孔加入 180 ~ 199 µL的工作液；

注：推荐使用黑色的酶标板，可有效降低反应孔之间的荧光信号干扰。

• 取试剂盒中的DNA 标准品 QS1，按浓度梯度进行稀释，制成一系列稀释的 dsDNA 标准品（浓度范围需在0 ~ 10 ng/µL) ；
• 向96 孔酶标板中的标准品孔中加入 10 µL 梯度浓度的 dsDNA 标准品；向 96 孔酶标板中的样本孔中加入待测的 dsDNA 样本 1 ~ 20 µL，使孔中总体积达到 200 µL，涡旋混匀 2 ~ 3 sec；
• 将酶标板置于室温环境下避光孵育2 min；
• 使用荧光酶标仪检测荧光信号值，选择合适的检测波段：激发波长 (Ex) 设置485 nm，发射波长 (Em)设置为530 nm；
• 测得的dsDNA 标准品的荧光信号值分别对应其浓度，绘制标准曲线；将测得的未知浓度 dsDNA 样本的荧光信号值代入标准曲线中，可计算出 dsDNA 样本的浓度。

附录：污染物对定量检测试剂盒的影响