StarLighter PDX 模型小鼠细胞浸润状态检测试剂盒

PDX 模型，全称为人源肿瘤异种移植模型（Patient-Derived Tumor Xenograft，PDX），是来源于患者的肿瘤组织、原代细胞植入免疫缺陷鼠的体内形成的移植瘤模型，是癌症机制研究和药物测试的有用工具。但随着传代次数增加，肿瘤组织保真度可能会下降。小鼠细胞浸润不仅影响模型的稳定性，还可能导致实验数据偏差。

StarLighter PDX 模型小鼠细胞浸润状态检测试剂盒能准确检测人源、鼠源核酸浓度，检测小鼠细胞浸润状态。试剂盒提供了基于探针法 qPCR 核酸定量所必须的所有试剂，通过分别生成人源核酸检测标准曲线、鼠源核酸检测标准曲线，然后用绝对定量法通过 2 条标准曲线计算得到待测样本的人源核酸拷贝数浓度、鼠源核酸拷贝数浓度，从而有效评估小鼠细胞浸润情况，确保模型的保真度。

1. 1. 使用前务必将试剂盒所有组分充分溶解并混匀。
   2. Primer & Probe Mix、ROX 染料对光敏感，长时间暴露在直射光下会导致荧光信号强度下降。
   3. 本试剂盒中提供的人/鼠混合模板 S1，对 S1 进行连续 10 倍梯度稀释，制备标准品，需要使用本试剂盒提供的 DNA 稀释液进行稀释。
   4. 确保提取的核酸样本的纯度符合要求。
   5. 根据 qPCR 仪器选择使用 ROX High 或 ROX Low。仪器与 ROX 参比染料对照表： 

产品应用
 

产品组分


储存及运输条件

-25 ~ -15℃ 避光保存，< 0℃ 运输。

本试剂盒提供了人/鼠混合模板（S1，0.25 × 108 copies/μL）（以下简称 S1）为 0. 25×108 copies/μL 的人和鼠标准模板，需要使用试剂盒提供的专用 DNA 稀释液组分将 S1 按比例稀释 10 倍，得到 S2，使用相同方法进行连续梯度稀释，得到 S2 ~ S6（0. 25×107 ~ 0. 25×103 copies/μL）。

稀释好的 S2 ~ S6 可在 2 ~ 8℃ 保存 8 小时以内，超过 8 小时请重新稀释。

样本质量

请使用合格的提取试剂盒提取 PDX 模型小鼠组织 DNA，由于不同试剂盒的提取纯度差异，可能造成qPCR 检测 Ct 值出现波动。样本洗脱液请使用超纯水或 Low TE 进行溶解。本试剂盒最高样本加入量不要超过 50 μg，最高样本加入体积不超过总体积的 1/2。

准确的移液操作

qPCR 是非常灵敏的技术，且本试剂盒需要对标准品进行稀释，因此结果的可靠性高度依赖于准确的移液操作。为确保检测结果准确，请注意以下操作：

1. 进行 S2 ~ S6 标准品稀释时，每个标准品的稀释后体积在 30 ~ 50 μL。
2. 每一次移取液体都要使用新的吸头。
3. 分配试剂后确保在吸头内没有液体残留。

污染和无模板对照

始终遵守良好的实验室规范，以避免工作区域的试剂、耗材和设备受到样本、标准品或扩增产物的污染。建议在每次检测中都设置无模板对照（No-Template Controls，NTC），用以检测在反应设置期间引入的污染。NTC 的 Cq/Ct 值应该至少比稀释的 S6 的 Cq/Ct 值多 3 个 Cq/Ct 值。

操作过程中，为减少污染发生，确保从低浓度到高浓度（即从 S6 到 S1）添加标准品到反应孔。

重复数据、数据可靠性、通量和每个样本成本

qPCR 是一种极其敏感的测量技术，易受多种来源的变化影响。标准品 S1 ~ S6，待测样本和阴性对照推荐均使用三个重复。

为了提高通量和降低每个样本的成本，重复次数可以减少到两次。在选择工作流程和通量要求的最佳策略时，请注意，数据的可靠性与重复数成正比。

问题与分析

1. 标准曲线扩增效率不在特定范围内（90 ~ 110%)，可能原因：

① S6 与 S5 相比 < 3.1 个循环，且 NTC 小于 S6 之后的 3 个 Cq/Ct 值。

② 扩增效率超过 100%，可能有污染。

③ 基线设置可能会延迟 S1 的 Cq/Ct 值，影响扩增效率，需要手动调整基线。

④ 不准确的移液操作。

2. R2 值 < 0.99，可能原因：

① 不准确的移液操作。

② 仪器操作不当或试剂保存不当。

3. 标准品间隔不正确 （不在 3.1 ~ 3.6 个 循环），可能原因：

① DNA S5 和 S6 之间的 ΔCq/Ct < 3.1 可能有污染。

② DNA S1 和 S2 之间的 ΔCq/Ct < 3.1 可能背景扣除有问题，需要手动调整基准。

③ ΔCq/Ct > 3.6，扩增效率差。需要确保所有组分在使用前彻底混合，确认所有组分均以正确的体积添

加，并且使用正确的扩增程序。

④ 试剂严重曝光会降低总荧光，并可能导致 Cq/Ct 值延迟，导致 ΔCq/ Ct 值> 3.6。

⑤ 不准确的移液操作，标准品稀释梯度不准确。

4. 平行对照之间重复性差，可能原因：

① 不准确的移液操作。

② 需要确保所有试剂在使用前彻底混合。

③ 存在仪器相关问题，需要确保使用正确的参比染料。

5. 待测样本的 Ct 值不在标准曲线的动态范围内，可能原因：

① 该样本状态导致，如核酸含量非常低，在检测限以下。

② 可能使用了过高或过低的样本投入量。

6. 标准品正常扩增，但待测样本没有，可能原因：

① 待测样本纯度不够，含有较多的抑制扩增成分。

② 样本浓度过低。